收到产品后,请先观察产品标签获知产品类型,准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度,然后对应查看使用说明。
一、质粒干粉(负20度保存,保质期90天,常温运输)
1、收到干粉质粒后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒;
2、将相应的感受态于冰盒上解冻,取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴 30min;
3、42度热激60s,冰浴2min,加入900μl无抗LB培养基,180rpm震荡培养45min;
4、6000rpm离心3min,留100μl上清重悬,再涂至对应抗性的LB平板上;
5、倒置培养过夜后,如菌落过多则稀释质粒转化,如没有菌落则取10ul质粒转化;
6、挑单菌落至对应抗性的LB液体培养基中过夜震荡培养,根据需要提取质粒。
平板图效果图如上
菌落过多或过少都有可能会影响后续提取结果
二、大包装质粒(负20度保存,保质期90天,常温运输)
1、收到大包装干粉质粒后请先5000rpm离心1min,再加入 100μl无菌水溶解质粒;
2、取适量液体质粒直接用于转化、酶切、转染等实验。
三、液体质粒(负20度保存,保质期90天,冰袋运输)
1、收到液体质粒后请甩动保存管,让液体质粒不要吸附在管壁上;
2、根据实验需求取适量质粒,其余保存于负20度冰箱。
四、甘油菌种(负80度保存,保质期90天,冰袋运输)
1、收到甘油菌种后请甩动保存管,让菌液不要吸附在管壁上;
2、用接种环在固体平板上四区划线,如有抗性就加对应抗性;
3、恒温培养箱倒置培养12~16h;
4、务必挑取单菌落接种于液体培养基中,如有抗性就加对应抗性;
5、摇床震荡培养过夜,根据实验需要培养菌种。
五、平板菌种(4度保存,保质期7天,冰袋运输)
直接挑取单菌落至液体培养基中,根据实验需要培养菌种。
六、其他产品
科研病毒 科研细胞 植物种子 滤纸质粒
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